Recentemente encontrei um problema durante o desenvolvimento e levei dois dias para finalmente resolvê-lo. Resuma-o para sua referência.
Baixei um projeto asp.net da minha caixa de correio para a máquina local, criei um diretório virtual, abri-o com o VS, executei o depurador e ocorreu um erro.
Em seguida, abra o IE e entre no diretório virtual, e aparece um erro informando que não há permissão para acessar a pasta.
Verifiquei as informações online e descobri que a conta aspnet não possui permissões de execução na pasta do projeto. Não há item de segurança no menu amigo da pasta do meu projeto (minha partição do sistema é NTFS, o que é muito estranho), então esse método ainda não resolve o problema.
Por fim, criei uma pasta DotNet na unidade C e movi o projeto para ela, e o problema foi finalmente resolvido.